背景: 下一代测序可以检测不确定性显着性(VUS)的变体，对于某些变体而言，基因治疗将是不利的。因此，应在双侧玻璃体切除术和输卵管病毒基因neparvovec-rzyl给药前确认复合杂合或纯合变异体的致病性。
实验目的: 描述一种体外诱变测定法，用于评估RPE65基因变异的致病性。
实验方法: 该案例系列是在2个三级转诊中心进行的。回顾了2008年9月5日至2019年12月31日的临床病史，影像学和电生理学检查结果。参与者为4例Leber先天性黑病的儿科患者，他们接受过评估或符合1至3期临床试验的纳入标准，或推荐用于Voretigene neparvovec-rzyl治疗。使用功能测定法确认新型RPE65 VUS对4例Leber先天性黑病的致病性。
实验结果: 4例Leber先天性黑osis病患者的RPE65有VUSs 。患者1和2是纯合VUS c.311G> T p。(G104V)的兄弟姐妹。患者3是具有1个已知病原性等位基因c.1202_1203insCTGG p。(Glu404AlafsTer4)和1个VUS的c.311G> T p。(G104V)的复合杂合子，它们分开分离了等位基因。患者4也是具有1个病原体变异体c.11 + 5G> A和1个反式变异体的复合杂合子，c.1399C> T p。(P467S)。体外诱变显示G104V和P467S RPE65蛋白具有催化活性(0%异构酶活性)。由于高腺相关病毒2衣壳中和抗体，患者1和2被排除在1期试验之外。患者3(G104V)和4(P467S)已成功使用Voretigene neparvovec-rzyl进行了外科手术基因治疗，在基因治疗干预后不到30天，他们对较低白光强度和视野的反应有所增强。
结论: 性本研究发现，在RPE65中发生错义突变的患者中，可以对蛋白质功能进行功能分析，以评估复合杂合和纯合情况下变异的致病性。考虑到基因治疗操作的潜在风险，应考虑进行体外RPE65活性测试，以避免治疗假基因型的可能性。
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